Un panel multiplex gastrointestinale analizza un singolo campione di feci alla ricerca di venti o pi\u00f9 agenti patogeni contemporaneamente e fornisce una risposta in una-cinque ore. Rispetto al vecchio approccio, in cui coltura, microscopia e test antigenici venivano richiesti separatamente nell'arco di diversi giorni, si tratta di un notevole passo avanti.<\/p>\n
Crea per\u00f2 anche un problema che prima non esisteva. Poich\u00e9 questi panel sono estremamente sensibili e ricercano microrganismi che nessuno aveva specificamente sospettato, rilevano di routine elementi presenti ma non responsabili dei sintomi. Imparare a leggere un referto multiplex significa capire quali rilevamenti richiedono un'azione e quali possono essere messi da parte.<\/p>\n
Un panel multiplex \u00e8 un test molecolare che amplifica e rileva simultaneamente molti bersagli patogeni diversi in un'unica reazione, utilizzando set di primer e sonde fluorescenti distinti per ciascuno. Nei test gastrointestinali, un panel tipico analizza insieme batteri, virus e parassiti.<\/p>\n
I sistemi commerciali pi\u00f9 diffusi includono BioFire FilmArray, QIAstat-Dx, BD MAX Enteric panels, Luminex NxTAG ed EntericBio; si differenziano per l'elenco dei bersagli, i tempi di risposta e la capacit\u00e0 di elaborazione. Alcuni sono basati su cartucce e possono essere eseguiti singolarmente; altri vengono processati in batch.<\/p>\n
La chimica \u00e8 la stessa di qualsiasi PCR, eseguita molte volte in parallelo. L'acido nucleico viene estratto dal campione di feci, poi distribuito in reazioni contenenti primer specifici per ciascun bersaglio. I bersagli a RNA, ovvero i virus enterici, richiedono prima una fase di trascrizione inversa, quindi questi pannelli combinano RT-PCR e PCR. L'amplificazione viene monitorata in tempo reale e ogni bersaglio viene distinto dal proprio canale fluorescente, dall'analisi della temperatura di melting o dalla separazione fisica in un array microfluidico.<\/p>\n
La sfida tecnica consiste nel fatto che i primer per oltre venti bersagli devono coesistere nella stessa reazione senza reagire tra loro, mantenendo al contempo la sensibilit\u00e0 per ciascuno. I moderni sistemi a cartuccia risolvono questo problema compartimentalizzando fisicamente le reazioni, il che spiega le loro buone prestazioni ma anche il costo notevolmente pi\u00f9 elevato rispetto ai test per singolo bersaglio.<\/p>\n
Non \u00e8 richiesto il digiuno n\u00e9 una preparazione dietetica. \u00c8 importante segnalare un recente uso di antibiotici, poich\u00e9 riduce la carica batterica e pu\u00f2 produrre falsi negativi. Il momento del prelievo \u00e8 fondamentale: campionare durante i sintomi attivi garantisce la resa pi\u00f9 alta.<\/p>\n
Un singolo campione di feci viene raccolto in un contenitore che spesso contiene un mezzo di trasporto come il Cary-Blair. Segui le istruzioni del kit per quanto riguarda il volume e la conservazione, ed evita la contaminazione con urina o acqua del water.<\/p>\n
I sistemi a cartuccia restituiscono i risultati in circa una-cinque ore. Le piattaforme di laboratorio con elaborazione in batch possono richiedere un giorno. Un aspetto pratico importante: un risultato batterico positivo da un pannello molecolare non fornisce un isolato, quindi se \u00e8 necessario un antibiogramma o una tipizzazione del ceppo a fini di sanit\u00e0 pubblica, occorre richiedere separatamente una coltura di conferma.<\/p>\n
I risultati vengono riportati come rilevato o non rilevato per ciascun bersaglio del pannello. La maggior parte dei referti elenca tutti i bersagli, quindi \u00e8 normale trovare una pagina con voci non rilevato e uno o due risultati positivi.<\/p>\n